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      多酚氧化酶(PPO)測試盒

      簡要描述:多酚氧化酶(PPO)測試盒測定意義:主要存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,是一種含銅的氧化酶, 能使一元酚和二元酚氧化產生醌,從而引起褐化,與果蔬加工、茶葉品質和組培等密切相關。
      測定原理:PPO能夠催化鄰苯二酚產生醌,后者在525nm有特征光吸收。

      • 產品型號:PPO-2-V
      • 廠商性質:生產廠家
      • 更新時間:2023-11-21
      • 訪  問  量:669
      詳情介紹

      多酚氧化酶(PPO)測試盒

      微量法100管/48樣。

      正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定。

      測定意義:

      PPO(EC1.10.3.1)主要存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,是一種含銅的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化產生醌,從而引起褐化,與果蔬加工、茶葉品質和組培等密切相關。

      測定原理:

      PPO能夠催化鄰苯二酚產生醌,后者在525nm有特征光吸收。

      需自備的儀器和用品:

      可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。

      試劑組成和配制:

      提取液:100mL×1瓶,4℃保存;

      試劑一:20mL×1瓶,4℃保存;

      試劑二:5mL×1瓶,4℃保存。

      粗酶液提?。?/p>

      1、細菌、細胞或組織樣品的制備:

      細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104 個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次); 8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

      組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

      2、血清(漿)或果汁樣本的處理:

      按照血清(漿)或果汁體積(mL):提取液體積(mL)為 1:5~10的比例(建議取0.1mL血清(漿)或果汁加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

      多酚氧化酶(PPO)測試盒測定步驟:

      1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至525nm,蒸餾水調零。

      2、樣本測定(在EP管中依次加入下列試劑)

      試劑名稱(μL)

      測定管

      對照管

      樣本

      50

       

      煮沸的樣本【注1】

       

      50

      試劑一

      200

      200

      試劑二

      50

       

      蒸餾水

       

      50

      37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)中準確水浴10min(酶促反應時間)后,95℃水浴5min(終止酶促反應),冷卻至室溫,10000g,25℃離心10min,收集上清,取200μL至微量石英比色皿或96孔板中,525nm處檢測測定管和對照管吸光度,計算ΔA=A測定-A對照。

      【注1】每個測定管需要設一個對照管,可以在不同對照管中加入不同樣品的粗酶液,然后集中進行5min 95℃水浴處理。

      PPO活性計算:

      a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

      1、血清(漿)或果汁PPO活性

      單位的定義:每分鐘每mL血清(漿)或果汁在每mL反應體系中使525nm處吸光值變化0.01為一個酶活力單位。

      PPO(U/mL)=ΔA×V反總÷(V液×V樣÷V樣總)÷0.01÷T=60×ΔA÷V液。

      2、組織、細菌或細胞PPO活性

      (1) 按樣本蛋白濃度計算:

      單位定義:每分鐘每mg組織蛋白在每mL反應體系中使525nm處吸光值變化0.01為一個酶活力單位。

      PPO(U/mg prot)=ΔA×V反總÷(V樣×Cpr)÷0.01÷T=60×ΔA÷Cpr

      此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。

      (2) 按樣本鮮重計算:

      單位定義:每分鐘每g組織在每mL反應體系中使525nm處吸光值變化0.01為一個酶活力單位。

      PPO(U/g 鮮重)=ΔA×V反總÷(W×V樣÷V 樣總)÷0.01÷T=60×ΔA÷W

      (3) 按細菌或細胞密度計算:

      單位定義:每分鐘每1萬個細菌或細胞在每mL反應體系中使525nm處吸光值變化0.01為一個酶活力單位。

      PPO(U/104 cell)=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.01÷T =0.12×ΔA

      V反總:反應體系總體積,0.3mL;V液:加入血清(漿)或果汁體積,0.1mL; V樣:加入樣本體積,0.05mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應時間,10min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500萬。

      b. 用96孔板測定的計算公式如下

      1、血清(漿)或果汁PPO活性

      單位的定義:每分鐘每mL血清(漿)或果汁在每mL反應體系中使525nm處吸光值變化0.005為一個酶活力單位。

      PPO(U/mL)=ΔA×V反總÷(V液×V樣÷V樣總)÷0.005÷T=120×ΔA÷V液

      2、組織、細菌或細胞PPO活性

      (1) 按樣本蛋白濃度計算:

      單位定義:每分鐘每mg組織蛋白在每mL反應體系中使525nm處吸光值變化0.005為一個酶活力單位。

      PPO(U/mg prot)=ΔA×V反總÷(V樣×Cpr)÷0.005÷T=120×ΔA÷Cpr

      此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。

      (2) 按樣本鮮重計算:

      單位定義:每分鐘每g組織在每mL反應體系中使525nm處吸光值變化0.005為一個酶活力單位。

      PPO(U/g 鮮重)=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.005÷T=120×ΔA÷W

      (3) 按細菌或細胞密度計算:

      單位定義:每分鐘每1萬個細菌或細胞在每mL反應體系中使525nm處吸光值變化0.005為一個酶活力單位。

      PPO(U/104 cell)=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.005÷T=0.24×ΔA

      V 反總:反應體系總體積,0.3mL;V液:加入血清(漿)或果汁體積,0.1mL; V樣:加入樣本體積,0.05mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應時間,10min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500萬。

       

       

       

       

       

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