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      產品展示 / products 您的位置:網站首頁 > 產品展示 > 生化試劑盒 > 氧化與抗氧化系列 > H2O2-2 -V過氧化氫(H2O2)測試盒

      過氧化氫(H2O2)測試盒

      簡要描述:注意:正式測定前取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
      測定意義:
      H2O2 是生物體內常見的活性氧分子,主要由 SOD 和 XOD 等催化產生,由 CAT 和 POD 等催化降解。H2O2 不僅是重要的活性氧之一,也是活性氧相互轉化的樞紐。一方面,H2O2 可以直接或間接地氧化細胞內核酸,蛋白質等生物大分子,并使細胞膜遭受損害,從而加速細胞的衰老和解體;另一方面H2O2 也是許多氧化應急反應

      • 產品型號:H2O2-2 -V
      • 廠商性質:生產廠家
      • 更新時間:2023-03-29
      • 訪  問  量:416
      詳情介紹

      過氧化氫含量(H2O2)試劑盒說明書


      分光光度法 50管/48樣


      注意:正式測定前取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

      測定意義:

      H2O2 是生物體內常見的活性氧分子,主要由 SOD 和 XOD 等催化產生,由 CAT 和 POD 等催化降解。H2O2 不僅是重要的活性氧之一,也是活性氧相互轉化的樞紐。一方面,H2O2 可以直接或間接地氧化細胞內核酸,蛋白質等生物大分子,并使細胞膜遭受損害,從而加速細胞的衰老和解體;另一方面H2O2 也是許多氧化應急反應中的關鍵調節因子,。


      測定原理:

      H2O2 與硫酸鈦生成黃色的過氧化鈦復合物,在 415nm 有特征吸收。


      需自備的儀器和用品:

      可見分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1 mL 玻璃比色皿、丙酮 60mL、濃鹽酸 10mL、研缽和冰。


      試劑的組成和配制:

      試劑一:丙酮 60mL×1 瓶,4℃保存;(自備)

      試劑二:粉劑×1 瓶,4℃保存;臨用前加入 10mL 濃鹽酸充分溶解備用。用不完的試劑 4℃保存;(溶解時間較長,約 30min,可 40℃-60℃加熱溶解,務必提前準備)

      試劑三:15mL×1 瓶,4℃保存;

      試劑四:60mL×1 瓶,4℃保存;


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      1、細菌或細胞樣品的制備:收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104 個):試劑一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 試劑一),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30次);用試劑一定容至 1mL;8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

      2、組織樣品的制備:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約0.1g 組織,加入 1mL 試劑一)進行冰浴勻漿;轉移至 EP 管中,用試劑一定容至 1mL,8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

      3、血清(漿)樣品:直接檢測。



      測定步驟:

      1、分光光度計預熱 30min 以上,調節波長至 415nm,蒸餾水調零。

      2、將試劑二、三和四 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)水浴 10min 以上。

      3、在 EP 管中按順序加入下列試劑


      試劑名稱(μL) 測定管 對照管

      樣本 吸取的量的為全部上清液

      試劑一  1000

      試劑二 100 100

      試劑三 200 200

      4000g,25℃離心 10min,棄上清,留沉淀

      試劑四 1000 1000

      加入試劑四溶解沉淀后,室溫靜置 5min,倒入比色皿中,測定 415nm 處吸光值 A。對照管只要做一次即可。計算 ΔA=A 測定-A 對照。


      注意事項:

      1、由于試劑一易揮發,試劑一必須先預冷再加,研磨時必須在冰上研磨。

      2、本試劑盒中試劑的揮發性較高,請帶一次性手套和口罩。


      H2O2 含量計算:

      1、標準條件下測定的回歸曲線,y = 0.7488x + 0.0006 (x 為標準品濃度,μmol/mL;y 為 ΔA)。

      2、血清(漿)中 H2O2 含量的計算:

      H2O2 含量(μmol/mL)=(ΔA-0.0006) ÷0.7488=1.34×(ΔA-0.0006)


      3、細菌、細胞或組織中 H2O2 含量計算

      (1) 按照蛋白濃度計算

      H2O2 含量(μmol/mg prot)= [ (ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(V1×Cpr)= 1.34×(ΔA-0.0006)÷Cpr

      需要另外測定,建議使用本公司 BCA 蛋白質含量測定試劑盒。


      (2) 按照樣本質量計算

      H2O2 含量(μmol/g 鮮重)= [ (ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(W ×V1÷V2)= 1.34×(ΔA-0.0006)÷W


      (3 ) 按照細菌或細胞密度計算:

      H2O2 含量(μmol/104)= [ (ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0027×(ΔA-0.0006)


      V1:加入反應體系中樣本體積,1mL;V2:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,

      mg/mL;W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500 萬。



      注意:

      標曲線性范圍為 0.1μmol/mL 到 2μmol/mL,吸光度 ΔA 線性范圍為 0.07-1.5,若 ΔA超過 1.5 則需要稀釋,計算公式乘以相應稀釋倍數。






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