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      過氧化氫酶(CAT)測試盒(鉬酸銨比色法)

      簡要描述:過氧化氫酶(CAT)測試盒(鉬酸銨比色法)
      注 意 :正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
      測定意義:
      CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,是最主要的H2O2清除酶,在活性氧清除系統中具有重要作用。

      • 產品型號:CAT-2 -V
      • 廠商性質:生產廠家
      • 更新時間:2023-05-05
      • 訪  問  量:482
      詳情介紹

      過氧化氫酶(CAT)測試盒(鉬酸銨比色法)                    

             分光光度法50管/48樣


      注   意 :正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

      測定意義:                          

      CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,是最主要的H2O2清除酶,在活性氧清除系統中具有重要作用。


      測定原理:

      H2O2在240nm下有特征吸收峰,CAT能夠分解H2O2,使反應溶液240nm下的吸光度隨反應時間而下降,根據吸光度的變化率可計算出CAT活性。


      需自備的儀器和用品:

      紫外分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水


      試劑組成和配制:

      提取液:60mL×1瓶,4℃保存;

      工作液:60mL×1瓶,4℃保存;


      粗酶液提?。?/span>

      1、細菌、細胞或組織樣品的制備:

      細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

      組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

      2、血清(漿)樣品:直接檢測。

      過氧化氫酶(CAT)測試盒(鉬酸銨比色法)

      測定步驟:

      1、分光光度計預熱30min以上,調節波長至240nm處,蒸餾水調零。

      2、測定前將CAT檢測工作液37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴10min。

      3、在1mL石英比色皿中加入35μL樣本和1mL工作液,混勻,室溫下立即測定240nm下的初始吸光值A1和1min后的吸光值A2,計算ΔA=A1-A2


      注意事項:

      出現負值怎么辦?

      檢查反應過程是否產生氣泡,氣泡多說明酶活性太高,氣泡影響產生了負值,可以將樣本用提取液稀釋10倍后再檢測。如果稀釋樣本或反應體系沒有產生氣泡仍然出現較小的負值,說明該樣本測不到該酶活。


      CAT活性計算:

      1、血清(漿)CAT活力的計算:

      單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。

      CAT(nmol/min/mL)= [ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=678×ΔA

      2、組織、細菌或細胞中CAT活力計算:

      (1)按樣本蛋白濃度計算:

      單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。

      CAT(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=678×ΔA÷Cpr

      (2)按樣本鮮重計算:

      單位的定義:每g組織每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。

      CAT(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T=678×ΔA÷W

      (3) 按細菌或細胞密度計算:

      單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。

      CAT(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T =1.356×ΔA

      V反總:反應體系總體積,1.035×10-3 L;ε:H2O2摩爾消光系數,4.36×104 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.035 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,1 min;W:樣本質量,g;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;500:細胞或細菌總數,500萬。






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