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      產品展示 / products 您的位置:網站首頁 > 產品展示 > 生化試劑盒 > 其它系列 > SD-2-UV莽草酸脫氫酶(SD)測試盒

      莽草酸脫氫酶(SD)測試盒

      簡要描述:測定意義:
      莽草酸途徑是存在于植物、真菌和微生物中的一條重要的代謝途徑,莽草酸脫氫酶是莽草酸合成途徑中的關鍵酶。

      測定原理:
      莽草酸脫氫酶催化莽草酸和NADP產生NADPH,檢測340nm下的吸光值增加速率來表示SD活性。

      • 產品型號:SD-2-UV
      • 廠商性質:生產廠家
      • 更新時間:2023-03-29
      • 訪  問  量:468
      詳情介紹

      莽草酸脫氫酶(Shikimate dehydrogenase,SD)試劑盒說明書

      分光光度法 50管/48樣

      注   意 :正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

      測定意義:

      莽草酸途徑是存在于植物、真菌和微生物中的一條重要的代謝途徑,莽草酸脫氫酶是莽草酸合成途徑中的關鍵酶。


      測定原理:

      莽草酸脫氫酶催化莽草酸和NADP產生NADPH,檢測340nm下的吸光值增加速率來表示SD活性。


      需自備的儀器和用品:

      紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。


      試劑組成和配制:

      提取液:液體60mL×1瓶,4℃保存;

      試劑一:液體60mL×1瓶,4℃保存;

      試劑二:粉劑×2瓶,4℃保存;


      粗酶液提?。?/span>

      細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

      組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。


      測定步驟:

      1、分光光度計預熱30min以上,調節波長至340nm,蒸餾水調零。

      2、樣本測定

      (1)在試劑二中加入25mL試劑一充分溶解混勻,置于37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴5min,現配現用。

      (2)取0.05mL樣本和0.95mL試劑二于1mL比色皿中,混勻,在340 nm波長下立即記錄20秒時的初始吸光度A1和5分20秒時的吸光度A2,計算ΔA=A2-A1。




      SD活性計算:

      (1)按樣本蛋白濃度計算:

      單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘產生1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。

      SD(nmol /min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V×樣Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr


      (2)按樣本鮮重計算:

      單位的定義:每g組織每分鐘每分鐘產生1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。

      SD(nmol /min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=643×ΔA÷W


      (3)按細菌或細胞密度計算:

      單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘每分鐘產生1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。

      SD(nmol /min /104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=1.286×ΔA



      V反總:反應體系總體積,1×10-3 L;ε:NADH摩爾消光系數,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.05 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,5 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;500:細菌或細胞總數,500萬。







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